杭州键一生物科技有限公司，由宁波市特优人才、宁波市杰出专家、省级领军人才、浙江省重点科技创新团队带头人与留学归国精英人才联合创办，是国家高新技术企业、杭州市高新技术企业、科技部认定科技型中小企业、杭州市雏鹰计划立项企业，是华东地区乃至国内具有影响和竞争力的自动化高端装备商。公司主营面向“医疗、医药和生命健康”等三大板块领域的自动化高端装备研发及产业化，拥有自主知识产权（48项授权专利和28项授权软件著作权）。已经上市产品包括：全自动细胞工作站、全自动细胞扩增仪、多功能细胞分选仪、制药级高通量细胞培养箱、高效存取型培养箱等医疗板块装备。正在研发产品包括“医药板块”、“生命健康板块”等系列装备。医药和生命健康装备“技术创新和升级换代”和医疗器械“进口替代国产化创新”是未来十年行业主旋律，相信杭州键一生物科技公司研发和产业化产品的市场前景和潜力巨大。

上海市政协常委陈芳源建议：将干细胞按照风险分层管理；要将医疗技术注册的干细胞临床研究和按照药品注册的临床研究要分开管理；近年来，以干细胞为核心的再生医学在全球生命科学领域的发展如火如荼，尤其在脑卒中、糖尿病等重大慢病领域及多种罕见病领域已逐步显现出优势。美国、韩国、日本、欧盟等已有近20种干细胞作为药品在成熟监管机制下通过药证审批上市。目前，我国在干细胞研究领域很活跃，研究项目数量仅次于美国，但尚无干细胞治疗药品获批上市。因此，上海市政协委员建议，上海在这方面要利用优势资源先行先试，加快推动上海干细胞研究的临床转化，促进其产业化。

随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展，转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中，其应用越来越广泛。本文将从多方面来深度解读细胞转染技术及一系列注意事项！细胞转染是指将外源分子导入真核细胞内以改变其基因型或表型能力的一种技术。转染的主要目的是研究基因的功能或基因产物，通过增强或抑制特定基因在细胞中的表达，并在哺乳细胞中产生重组蛋白。转染根据是否能把外源核酸整合到宿主染色体上分为瞬时转染和稳定转染。瞬时转染：外源性DNA/RNA不整合到宿主染色体中，因此一次宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但是通常只能维持几天，多用于启动子以及其他调控元件的分析。一般在24-96小时内分析结果。核酸类型比较广泛，质粒DNA、siRNA、miRNA、和mRNA都可进行瞬时转染。稳定转染：通过这种转染方式外源性DNA既可以整合到宿主染色体中，也可能作为一种游离体存在。外源DNA整合到宿主染色体中概率很小，大约1/10000转染细胞能整合，通常需要通过一些选择性标记，得到稳定转染的同源细胞系。稳定转染的核酸多为质粒DNA。细胞转染方法挺多的，该如何选择呢？莫急，且看小优将细胞转染常用的技术及其优缺点给您娓娓道来。细胞转染实验大battle常用的转染方法有以下几种：物理介导：电穿孔法、显微注射和基因枪化学介导：磷酸钙共沉淀法、阳离子聚合物法和脂质体转染方法生物介导：病毒介导法01物理介导法1.电穿孔法电穿孔是通过高强度的电场作用破坏细胞膜电位，瞬时提高细胞膜的通透性，从而吸收周围介质中的外源分子。电穿孔法可适用于所有细胞类型的瞬时和稳定转染，但是其高电压脉冲导致细胞致死率非常高，并且对DNA和细胞的用量很大。这个缺点不仅没有让这项技术就此没落，还促进了它更好的发展。1998年，市场上第一个有效的、非病毒介导的Nucleofector™ 技术开发成功，可高效转染传统方法难以转染的原代细胞，干细胞，神经元和细胞系，为疾病研究治疗如基因治疗，免疫治疗和干细胞生成开发带来了新的机遇。Nucleofector™技术是Lonza公司的专利创新技术，是一种改进的电穿孔技术，利用电击在细胞膜上开个小孔，综合各种特定细胞转染程序与转染液的作用，核酸底物不仅可以进入细胞质，还可直接通过核膜进入细胞核。这使得细胞最高转染可达99%，而且实现转染不依赖于细胞的分裂。Nucleofector™技术优势：① 质粒DNA的转染效率高达90％，siRNA的转染效率高达99％。② 极好的保存转染细胞的生理状态和活力。③ 转染后不久即可进行转染分析。④ 拥有650多种细胞类型特定方案，可直接进行转染。⑤ 转染底物包括DNA，mRNA，miRNA，siRNA，肽或蛋白质。⑥ 转染难以转染的细胞，包括原代细胞，干细胞，神经元和细胞系，以及贴壁细胞。⑦ 文献引用量达8000+篇⑧ 使用一次性无菌Nucleocuvette™容器降低交叉污染的风险⑨ 不同的Nucleofector™平台具有灵活的扩展功能，设备平台之间条件的轻松转移，扩展您的研究。优点很多，唯一的缺点是需特殊仪器设备Nucleofection™技术组件：① Nucleofector™设备，包括针对每种优化的细胞类型进行预编程的独特电参数，可将底物直接递送至细胞核和细胞质。不同的平台针对各种应用提供了不同的规格。② Nucleofector™套件，包含专用的Nucleofector™解决方案和所需试剂耗材。这些充当高转染效率和细胞生存力的保护环境，同时保持生理相关的细胞状况。还提供了指定的Nucleofection容器，移液管和荧光阳性对照载体（pmaxGFP™对照载体）。③ 优化的方案可为最佳核转染条件提供全面指导，并提供细胞来源，传代，生长条件和培养基以及转染后培养的技巧。邀您扫码预约专属讲座，深入了解核转染仪相关产品：lonza 电转仪爆款电转试剂盒2.显微注射法需要使用精密的仪器，直接将外源性核酸注射至宿主细胞核内。多用于转基因，由宿主基因组序列可能发生的重组，缺失，复制或者异位等现象使外源基因嵌入宿主的染色体中。但是转染细胞数有限,多用于工程改造或转基因动物的胚胎细胞。3.基因枪法又名生物弹道技术(Biolistic Technology)，用压缩气体(氦或氮等) 动力产生一种冷的气体冲击波进入轰击室，把粘有DNA 的细微金粉打向细胞，穿过细胞壁、细胞膜、细胞质等层层构造到达细胞核，完成基因转移。该方法可用于人的表皮细胞，纤维原细胞，淋巴细胞系以及原代细胞，不易毒害细胞，但是转化效率较低。02化学介导法1.磷酸钙共沉淀法借助于形成一种DNA-磷酸钙复合物沉淀黏附在细胞膜表面，通过细胞的内吞作用而使DNA被细胞捕获。沉淀颗粒的大小和质量对于转染的成功至关重要，也受pH值、钙离子浓度、DNA浓度、沉淀反应时间、细胞孵育时间等因素影响。可适用于稳转瞬转，操作简便花费相对较低，但转染效率低，10-20%，并且重复性很差。2.阳离子聚合物法带正电的聚合物与核酸带负电的磷酸基团形成带正电的复合物后与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用，并通过内吞作用进入细胞。具有阳离子脂质体的转染效率高，操作简单，适用范围广，重复性好等特点外，还具有在体内转染效率高，细胞毒性低等特点。3.脂质体转染方法带正电的脂质体与带负电的核酸磷酸基团形成DNA-阳离子脂质体复合物，再与细胞膜上的唾液酸残基的负电核结合，可能经过内吞作用被导入细胞。该方法使用简单，可携带大片段DNA，通用于各种类型的裸露DNA或RNA，能转染各种类型的细胞，转染效率、转染的稳定性和可重复性大大提高。但转染时需要去除血清，血清的缺失会导致细胞毒性增加；转染效果也随细胞类型变化大。实验步骤：❤ 在单独试管中分别稀释核酸及转染试剂；❤ 脂质体与核酸的磷酸骨架结合，形成复合物；❤ 脂质体上的正电荷有助于复合物与细胞膜结合；复合物通过内吞作用进入胞浆；❤ 分析细胞瞬时基因表达或沉默情况。相关产品03生物介导法病毒介导法病毒介导法转染效率特别高，尤其是难以转染的原代细胞、活体细胞，同时具有细胞毒性很低的优势。但是，病毒转染方法的准备程序复杂，构建病毒周期长，环节多，易出错，费用也高，常常对细胞类型有很强的选择性，在一般实验室中很难普及。1.逆转录病毒(RNA)通过病毒侵染宿主细胞的机制将外源基因整合到宿主细胞的染色体中，导致基因失活或激活癌基因，构建稳转株。可以用于难转染的细胞，原代细胞，体内细胞等，但携带基因不能太大（<8kb）,,需考虑安全因素。2.腺病毒(双链DNA)腺病毒除了卵细胞以外几乎在所有已知细胞中都不整合到染色体中，因此不会干扰其它的宿主基因。瞬时表达，可以包装8kb左右外源基因，转染较容易，但是转染效率不高。实验步骤：❤ 通过基因克隆生成重组病毒❤ 采用非病毒法转染包装细胞系，扩增并分离得到重组病毒颗粒❤ 纯化并滴定病毒液❤ 转导目的细胞（含有病毒特异性的受体）❤ 去除培养物中的病毒，并加入新鲜培养基❤ 分析细胞瞬时基因表达或沉默情况相关产品04注意事项核酸质量DNA:内毒素会导致转染效率显著下降，特别是对内毒素敏感细胞比如原代细胞、悬浮细胞和造血细胞或者想要获得最高的转染效率和最低的细胞毒性，因此最好选择内毒素含量较低的质粒抽提试剂盒。siRNA: 需合理的计算siRNA的浓度，过多的siRNA会导致细胞毒性甚至死亡。细胞质量细胞密度：不同的转染试剂，对细胞密度的要求不尽相同。在进行不同核酸或不同细胞系的转染时，需要根据说明书再次优化实验条件。细胞状态：不同细胞使用不同的培养基，血清和其他添加物。高的转染效率需要细胞保持良好的状态，通常在转染前24小时分细胞，这能够提供正常细胞代谢，增加对外源DNA摄入的可能。除此之外，要保证避免细菌，支原体或真菌的污染。转染方法及转染试剂根据所转染细胞及底物选择适合的转染方法及转染试剂。理想的细胞转染应该是转染效率高；毒性低；方法简单；省时省力。其实无论采用哪种转染技术，要获得最优的转染结果，可能都需要对转染条件进行优化（也可以选择优化好的试剂盒）。影响转染效率的因素远不止上述提到的这些，从细胞类型、细胞培养条件和细胞生长状态，质粒的大小以及转染方法的操作细节等等，都可能影响到最终的实验结果。如果有高品质的优化好的操作方案及试剂盒，那就果断选择，相信会事半功倍的。最后希望大家都有一个满意的转染结果。

建强伟业作为科研服务行业的专业运营商，实验室整体服务的倡导者，每天都在为无数科研工作者排忧解难，提供优质的个性化服务，也因此经常获得客户的认可和表扬。 在众多支持我们的客户中，有一位科学家，她用了一种我们从来没敢想的方式对我们的服务表达了肯定和褒奖。 近日，中国科学院饮用水科学与技术重点实验室的王东红团队，在ACS（注1）期刊上发表了一篇题为《双酚AF在饮用水氯消毒过程中的反应动力学、降解机理及pH值的影响》的论文。其中作者一栏中，赫然（必须用这个形容词才能表达我们的震惊）出现了我司CEO 高建先生的英文名。  大家都知道，我司是科研服务运营商，本身并不承担科研项目。那问题就来了，我们CEO的名字怎么会被列入论文作者一栏中呢？难道是重名？又或是他自己开了第二职业？重洗了技能点？ 发现这一情况的客服人员百思不得其解，于是第一时间与王东红研究员取得联系。经过确认，不是同名，Steven Gao就是指我司CEO高建先生。于是，该客服人员从疑惑状态直接变成了眩晕状态，再然后公司群里就炸窝了。 非科研领域的小伙伴可能会撇撇嘴说：多大点事呀，不就是提了一个名字嘛，还震惊，还眩晕，至于吗。我们想说，真的至于！ 简单说吧，在科学研究中，总会有一些关键性的样品、标准品或仪器设备，它们的品质和稳定程度直接决定着实验的准确性和成功率。而在论文中，为了对实验结果提供足够的细节支撑，会写明这类关键性“实验用品”的出处和基本信息。但是，绝大多数情况下，论文中只会提及是哪家公司的哪种产品（产品编号或试剂CAS号），极少出现将该产品供应商CEO的名字直接放在作者一栏中的情况。 这种情况只有一种可能，那就是该公司提供的产品或服务，对这项研究起到了不可替代且至关重要的作用！  那么，下一个问题是，我们到底做了什么？能让一位杰出的科学家采用这种优雅又高端的方式来表扬我们呢？ 这就要简单说一下这篇论文的相关领域研究了……咳咳，真的只能简单说一下，论文太专业，小编脑细胞死了好几十万也只能了解个皮毛。（论文放在文章最后，有兴趣的朋友可以下载阅读） 双酚A（BPA）是一种环境激素，它是聚碳酸酯塑料和环氧树脂生产中最广泛使用的单体工业化学品之一。由于广泛的接触途径和对人体健康的危险影响，许多国家已限制BPA的使用，这也促使了与双酚A结构相似并取代他的双酚类似物(BPs)的产生，只要一直用BPs取代双酚A，预计全球范围内BPs产生率会有所上升。 氯消毒长期以来一直被用于饮用水处理过程中的消毒杀菌，然而氯消毒的过程会产生对人健康有害的消毒副产物（DBPs）。这次，王东红团队就以BPAF做研究对象，研究了BPAF在饮用水氯消毒过程中的反应动力学和降解机理，阐释了pH值对于BPAF亲电取代机制和电子转移机制的影响，并推导了驱动电子转移机制的关键反应。 要研究BPAF在不同酸碱度情况下的降解，就需要一些特殊的化合物，作为检测的目标产物。可是，目前市场上并没有现成的此类产品，需要个性化定制合成。 这些化合物包括：3-氯双酚AF (3-Cl1BPAF)，3,3′-二氯双酚AF (3,3′-Cl2BPAF),3,3′,5-三氯双酚AF(3,3′,5-Cl3BPAF),3,3′,5,5′-四氯双酚AF(3,3′,5,5′-Cl4BPAF)于是，该论文的第一作者徐雄老师马上就想到了我们建强伟业!  建强伟业作为科研服务行业的资源供应商，整合产品资源是我们的强项，帮助老师完成目标化合物的定制也是我们的个性化服务之一。因为这几种化合物的定制难度较大，时间也比较紧张，因此由我司CEO高建先生亲自牵头，调集资源、产品和技术咨询等部门的精英，组成了临时小组，为该项目提供专项服务。 最终，在多方共同努力之下，我们按时保质保量的完成了这一任务，为此项研究提供了坚实的基础支持。建强伟业也以这种特殊的方式参与到了改善环境，降低污染的研究当中，也就有了文章开头的那一幕。CEO高建先生在论文中的作者信息位置被提及，这是对我司多年来所秉持的“为所有想专注科研的人提供一切可能”这一价值观的高阶认可方式。 同时，也让我们更坚定了自己的理念：WE TOGETHER，BE STRONGER。建强伟业将继续在这条路上勇往直前，成为科研工作者的坚强后盾，为中国科研事业的发展竭尽所能。 轻松科研，一路由我! 注1：美国化学学会（AmericanChemicalSociety，ACS）成立于1876年，现已成为世界上最大的科技协会。ACS出版的化学及相关学科期刊具有很高的质量，据ISI的JournalCitationReport(JCR)统计，ACS的期刊是化学领域中被引用次数最多的期刊。 文献下载：双酚AF在饮用水氯消毒过程中的反应动力学、降解机理及pH值的影响

美仑讲堂秒懂细胞培养基细胞培养1、细胞培养基本概念细胞培养是指从体内组织取出细胞在体外模拟体内环境下，使其生长繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。细胞培养的培养物可以是单个细胞，也可以是细胞群。meilunbio®可提供各类细胞株，具体参看http://www.meilune.com/categorys.php?id=3842、细胞培养基本条件细胞培养基是细胞培养的基础，它为动物细胞的健康快速成长提供营养物质。所以只要用到细胞来制造生物技术产品，细胞培养基的重要作用就无可替代。3、细胞培养基种类细胞培养基的种类很多，按其来源分为合成培养基和天然培养基（目前使用的培养基绝大部分是合成培养基）。合成培养基是根据天然培养基的成分，用化学物质模拟合成、人工设计、配制的培养基。最早开发的基础培养基（minimal essential medium, MEM），其本质为含有盐、氨基酸、维生素和其他必需营养物的pH缓冲的等渗混合物。在此基础上，DMEM、PRMI1640、DMEM/F-12等各种合成细胞培养基被不断开发出来。meilunbio®可为您提供各种经典的细胞基础培养基，这些产品均经过严格的质量控制和检测（见表1），确保优良的细胞培养效果。meilunbio®也可提供不同配方分型的定制培养基，以供不同的实验应用与需求。可参看《细胞培养产品选择指南》。表1.meilunbio®基础培养基质控指标与依据质控指标依据外观及澄清度中华人民共和国药典2015版四部通则0901-0902pH值中华人民共和国药典2015版四部通则0631渗透压中华人民共和国药典2015版四部通则0632细菌内毒素中华人民共和国药典2015版四部通则1143无菌中华人民共和国药典2015版四部通则1101细胞生长试验中华人民共和国化工行业标准《哺乳类动物细胞培养基》HG/T3935-2007第707条稳定性试验行业标准及ICH指导原则美仑信息电话：400-659-9898企业QQ：400-659-9898微信：meilune-com地址：大连市开发区双D港双D二街75号官网：www.meilune.com